熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定， 不但可以做般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化， 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與能之間的關(guān)系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品(如凝膠條、粉末)的光譜掃描。

構(gòu)成

1. 光源：

為壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強度幾乎相等，故較常用。

2．激發(fā)單色器：

置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或*單色器，篩選出定的激發(fā)光譜。

3．發(fā)射單色器：

置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出定的發(fā)射光譜。

4． 樣品室：

通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排；測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。

5． 檢測器：

般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大并轉(zhuǎn)為電信號。

基本原理

由壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。

物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光．

不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能的分布具有各自不同的征，這種征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地行物質(zhì)的鑒定。

在溶液中，當熒光物質(zhì)的濃度較低時,其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標準曲線法行。